摘要：为研究夏枯草注射液的抗炎及抗菌作用，用二甲苯、蛋清分别造成小鼠和大鼠炎症模型来考察夏枯草注射液的抗炎作用，通过体外、体内抑菌试验来评价其抗菌作用。结果显示，夏枯草注射液能显著抑制二甲苯所致的小鼠耳肿胀和对蛋清致大鼠足跖肿胀，体外抗菌实验表明夏枯草注射液对痢疾杆菌、大肠杆菌、肺炎双球菌、溶血性链球菌有较好的抑菌作用，夏枯草注射液对腹腔注射肺炎双球菌ATCC 27853引起小鼠死亡的保护作用。因此，夏枯草注射液具有抗炎、抗菌作用，该试验可为夏枯草注射液的临床应用提供依据。
关键词：夏枯草注射液；抗炎；抗菌
夏枯草为唇形科植物夏枯草Prunella vulgaris L.的干燥果穗，具有清肝泻火、明目、散结消肿之功效，主要用于目赤肿痛、乳痈和疮肿[1]。夏枯草在古典书籍中均有记载，是常用的清热泻火药，可用于治疗温病[2]。现代药理研究表明，夏枯草具有消炎、抗菌、降血糖、抗病毒及抗氧化等作用[3]。夏枯草夏枯草注射液是由江西新世纪民星动物保健品有限公司研制的中药注射剂，用于防治畜禽感染性疾病。现将夏枯草注射液抗炎及抗菌作用报告如下。
1 材料
1.1 试验动物
小鼠，昆明种，体重18～22g，雌雄各半，由江西中医学院实验动物中心提供；SD种大鼠，雌雄各半，体重180～220g, 由江西中医学院实验动物中心提供。
1.2 菌株
痢疾杆菌ATCC 25923、大肠杆菌ATCC 25922、肺炎双球菌ATCC 27853、溶血性链球菌CMCC (B)10231，由江西省临床检验中心提供。
1.3 药品、试剂及器材
夏枯草注射液（10ml/支，2g生药/ml），江西新世纪民星动物保健品有限公司，批号：20100501；双黄连注射液，黑龙江多多药业有限责任公司，批号：20090922；
二甲苯，天津市恒昊公司化学试剂厂；5%去纤维羊血的Mueller-Hinton琼脂(简称5％MH琼脂)、杭州天和微生物试剂有限公司；大鼠灌胃器、足跖容积测定器、电子天平（FA1004N，上海精密科学仪器有限公司）、二氧化碳培养箱B5060（美国FISHER）。
2 方法与结果
2.1 夏枯草注射液对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响
取小鼠50只，雌雄各半，按体重、性别随机分5组，每组10只，即空白组，阳性药物对照组双黄连注射液；夏枯草注射液4.0g、6.0g、8.0g生药/kg组，各给药组连续肌内注射给药3天，每天1次，每次0.1ml/10g，空白组肌内注射等容量的生理盐水。于末次给药30分钟后，用二甲苯棉球接触小鼠左耳约5秒钟，15分钟后脱颈椎处死，以打孔器将小鼠双耳相同部位等面积切下，用电子天平精确称准，以左耳重减右耳重为小鼠的耳肿胀度，并求出抑制率。结果见表1。
与空白组比较：*P<0.05,**P<0.01
表1可以看出，夏枯草注射液能显著抑制二甲苯所致的小鼠耳肿胀，夏枯草注射液组与空白组相比有显著意义（P<0.01），与剂量呈相关性。
2.2 夏枯草注射液对蛋清致大鼠足肿胀的影响
取大鼠60只，雌雄各半，随机分为对照组、双黄连注射液、夏枯草注射液高、中、低剂量组，每组10只。各给药组连续肌内注射给药，每天1次，每次1ml/100g，连续3天，空白对照组肌内注射等容量的生，理盐水。于第3天，给药一次后1小时后，在各大鼠右侧足跖皮下注射100％的新鲜蛋清0.05ml/只，用自制足跖容积测定器于致炎后0、1、2、4、6小时分别测定标记位置的右后足跖容积，计算足肿胀度＝致炎后容积－0小时容积（ml），用t检验法，进行数据统计。见表2。
表2可知，夏枯草注射液在观察期内均能不同程度地抑制蛋清致的大鼠足肿胀，结果表明夏枯草注射液蛋清致大鼠足肿胀有一定抑制作用。
2.3 夏枯草注射液体外抑菌试验
2.3.1 药物平板培养基的制备
取灭菌试管8支，依次编号，排列于试管架上。按无菌操作法，用移液管吸取无菌生理盐水加入各试管，每管2ml，第1管不加生理盐水，然后吸取夏枯草注射液各2ml加入第1、2管，吹匀；接着从第2管吸出2ml放入第3管，依次逐管按二倍稀释至第8管。取8个无菌平皿，在盖上作编号1～8号，将1～8号试管中的药液2 ml加入到相应的1～8号平皿中。然后向平皿内加入已熔化并冷却至40℃左右的培养基18ml，立即摇动平皿，使培养基与药液充分混匀，其含夏枯草注射液的浓度分别为2.0、1.0、0.5、0.25、0.12、0.06、0.0 3、0.01g生药/ml。
2.3.2 细菌的接种和培养
将痢疾杆菌、大肠杆菌、肺炎双球菌接种在MH琼脂平皿上、溶血性链球菌接种在5%MH琼脂平皿上，在5%～8%CO2孵箱中，37℃培养16～18小时，制成浓度约为109/ml的菌液，用接种环分别蘸取各细菌液划线接种于1～8号含药平皿的不同区域，种好后放入5%～8%CO2孵中，37℃培养24小时取出，观察不同细菌在不同浓度的药物平皿上的生长情况，使细菌不生长的最低浓度即为药物对该菌的最低抑菌浓度（MIC）。见表3。
表3 夏枯草注射液的体外抑菌作用（平皿法）
2.4 夏枯草注射液对腹腔注射肺炎双球菌引起小鼠死亡的保护作用
取18～22g小鼠80只，雌雄各半，按性别、体重随机分为8组，即生理盐水组，阳性药物对照组（双黄连注射液6.4 g生药/kg），夏枯草注射液、双黄连注射液肌注，每天1次，给药3天，生理盐水组肌内注射,等容量的生理盐水。上述药物组均于末次给药30分钟后，各组小鼠腹腔注射109/ml肺炎双球菌ATCC 27853造成感染，每只0.5ml。然后观察小鼠的死亡情况，连续7天，统计各组的死亡率，卡方检验比较各组差异。
结果表明，夏枯草注射液对腹腔注射肺炎双球菌ATCC 27853引起小鼠死亡有的保护作用。
3 讨论
夏枯草注射液是夏枯草经提取加工制成的灭菌水溶液，夏枯草味辛、苦，性寒，有降糖、降压、抗菌、抗病毒、抗炎、抗肿瘤及活血化瘀等功效[4,5]。现代研究已涉及到抑菌抗炎、抗病毒、抗肿瘤以及对免疫系统、呼吸系统的作用等方面[6]。夏枯草水煎剂具有广谱抗菌活性[7]，醇-醚提取物对金黄色葡萄球菌、卡他球菌、肺炎链球菌、甲型链球菌、铜绿假单胞菌等抑制作用较明显[8]；醇提物中的水溶部分对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌、枯草杆菌、青霉和黑曲霉均有抗菌抑菌作用[9,10]。马德恩[11]通过大鼠耳肿胀、足肿胀实验表明夏枯草水煎醇沉液对早期炎症反应有显著抑制作用，提示夏枯草抗炎作用与肾上腺皮质激素合成、分泌加强有关。
夏枯草注射液具有抗炎及抗菌作用，与上述文献报道相符，该试验可为夏枯草注射液的临床应用提供药理学依据。
附件：夏枯草注射液新兽药注册证书及专利证书
参考文献：
[1] 中国兽药典委员会主编.中华人民共和国兽药典(二部).农业出版社.2010年版
[2] 刘钟杰,许剑琴主编.中兽医学·第三版,2002 :168.
[3] 庄玲玲.夏枯草药理作用研究进展[J].中国中医药信息杂志,2009,16 卷增刊:94-96.
[4] 陈立亚. 迷迭香酸的研究概况.中国药事[J].2007, 21(11): 926-927 .
[5] 刘伟,丁海杰.HPLC测定夏枯草中熊果酸、齐墩果酸、迷迭香酸的含量[J].中成药,2008,30( 4): 577-579.
[6] 朱鹤云,彭秀玲,冯波.正交试验优选夏枯草中迷迭香酸超声波提取工艺[J].吉林医药学院学报,2011,32(1):11-14.
[7] 王放银,段林东,赵良忠.夏枯草抗菌成分的提取及其抗菌效果研究[J].西南农业大学学报(自然科学版),2004,26(6):773-775.
[8] 王初,周晓芳,陈伟英.白毛夏枯草鲜汁治疗烫伤的实验研究[J].中国现代应用药学杂志,2003,20(4):311-312
[9] 桂晓虹,梅建.夏枯草对结核分枝杆菌的药物敏感性研究[J].中华中西医杂志,2003,4(10):1461-1462.
[10] 白洁,孙海峰,陈翔飞.4种中药体外抗结核分枝杆菌H37RV的研究[J].时珍国医国药,2007,18 (1):77-78.
[11] 马德恩,王竹梅,马爱英.夏枯草的抗炎作用及其对免疫器官影响的研究[J].山西医药杂志,19 83,12(2):4-7.
责任编辑：喻新霞
