近年涌现出来的恒温基因扩增方法，不再需要升降温的仪器，操作步骤简化了。但与PCR方法一样对基因提取要求很高，基层单位几乎无法操作。最主要的应用障碍还是扩增产物的污染问题，疫病目的基因片段被成亿倍地大量扩增后容易形成气溶胶，后续检测的样品很容易被污染，出现假阳性现象，无法保证结果的准确性。按卫生部对PCR试剂使用的规定，检测场地要分四个独立操作区，人流物流只能单方向进入各个区域，避免发生交叉污染。空气排风的流向也要单一方向。尽管荧光定量PCR（qPCR）和后续恒温扩增方法执行扩增产物不开盖的检测方式，但现有扩增反应管难免意外渗漏或开盖，因此无法避免污染的发生。鉴于严重的污染问题，国内只有省级与部分地区级动物疫控部门，以及大规模的养殖集团中心实验室才配备了PCR仪器，而且使用频率有限。
快灵生物的基因试纸卡产品提供了全套领先的解决方法，对DNA、RNA实现了常温下的快速简单提取，将胶体金试纸技术结合恒温基因扩增技术达到了高灵敏度的检测，专利申请中的防污染试纸卡装置彻底消除到了基因扩增产物的污染问题。一步法恒温扩增技术及该试剂产品常温运输方式的实现，开启了开启基因检测试纸卡步入养殖场的时代。
基因试纸卡是目前最适合进行动物疫病防疫的产品。目前兽医学上进行动物疫病诊断最依赖的是免疫学抗体及抗原检测试剂盒或层析试纸条。但抗体检测的结果更多反映了动物的免疫保护状况，除了个别项目如伪狂犬的gE抗体或口蹄疫的非结构蛋白抗体，其他抗体无法确定动物的感染状况。而且动物在遭受感染后，病毒要在体内潜伏一定时间，动物才会产生抗体。这段时间就是“窗口期”。疫病抗原的免疫试剂能直接检测到抗原，能缩短窗口期。但它依赖于识别特殊抗原表位的抗体。尤其是种属特异性，亚型特异性，或毒株毒力相关表位特异的抗体，很难筛选到覆盖了合适范围的病原范围的两个抗体来匹配夹心法试剂。此外疫病抗原的免疫试剂如ELISA的细菌检测灵敏度一般在105~107/ml，相对基因检测技术的灵敏度如HIV病毒50拷贝/ml，有明显的差距。很多不处在发病状况的动物有携毒甚至排毒状况，但其浓度偏低，抗原检测试剂灵敏度无法检测出。据报道，HIV的qPCR可缩短窗口期至1周以内。拥有相同灵敏度的基因试纸卡产品也能提前确诊病原，很有应用价值。
基因试纸卡检测盒的好处之一在于新产品研发的快捷方便。理论上说，只要能在基因库中查询到正确的基因序列，一周时间内就能在实验室研发出任何新的检测产品。当然新产品需要通过适当地临床试验进行特异性确认。如果是对某个容易发生基因变异的病原进行种属通用型的基因检测，那需要更细致的临床复核工作。目前快灵生物开发的产品系列有猪疫病，禽疫病，人畜共患疫病，食源性致病菌，宠物疫病，水产疫病，其他类的产品还在进行基因序列的比对和引物的设计，很快可以推向市场，我们欢迎客户提出他们有需求的临床检疫项目进行定制开发。
猪e网：张总，您介绍的检测技术很让人振奋，我能感觉它成功的推广应用会给畜牧业疫病检测带来巨大的改变，请介绍一下这类产品在具体应用过程中有哪些优势？
上海快灵张永军总经理：我们充分考虑到了基层养殖户的条件和需求，提供了一套全新的基因检测解决方案，快灵生物的基因试纸卡检测盒的优势在于：
1.快灵生物的基因提取试剂在常温下10分钟内能完成DNA与RNA样品的提取。基因提取方法有许多商业产品，按原理分有三类产品：硅胶柱法、磁珠法和酚-氯仿抽提法，但这些方法有一定的使用限制，如提取时间均在30min以上且操作繁琐，硅胶柱法和磁珠法的核酸提取回收率不高。尤其是在RNA病毒的提取上，大部分产品要求在低温冷冻条件下提取操作，基层单位无法实现。目前基因变异最快，危害性最大的疫病往往都是RNA病毒。快灵生物经过无数次的实验摸索，终于配制了独特的基因提取试剂，仅需微型高速离心机10分钟两步离心就完成了基因提取，解决了RNA的基层提取简单化难题。简单的基因RNA提取试剂是基因试纸卡步入基层应用的基础。
2. 快灵生物通过胶体金试纸实现了基因扩增产物的高灵敏检测。胶体金试纸已经成为人类医学免疫检测技术的三大类产品之一，在农业领域也已经广泛使用，是最适合农牧行业基层单位使用的产品。无论是医学乙肝表面抗原，还是食品安全的克伦特罗，没有任何样品前处理的情况下胶体金试纸的检测灵敏度能达到纳克级别（单位ng/ml）。而基因扩增技术的特点则是迅速从极其痕量的样品扩增复制到亿万倍浓度。这两个技术结合在一起则是完美的高灵敏技术。我公司对照试验表明，当PCR扩增产物在琼脂糖凝胶电泳上呈现微弱信号时，快灵生物的胶体金试纸100倍稀释后仍有明显信号。当LAMP恒温扩增溶液采用染料（SYBR Green I）只能检测到微弱信号时，快灵生物的胶体金试纸100倍稀释后仍有明显信号。因此快灵生物的基因试纸卡能实现更高灵敏度的信号检测，或者在同样的产物浓度下，能保证更好的信号判别。
3. 快灵生物专利申请中的防污染基因试纸卡，是目前解决基层单位基因扩增产物污染的最佳方案。尽管在荧光定量PCR和LAMP等方法中，可以不开盖进行检测，但现有的反应试管并没有严格密封的结构设计，渗漏与意外开盖仍然可能发生。某些采用了层析试纸进行基因检测的商业产品气密性较差。层析试纸上的扩增产物形成的气溶胶在白天与晚上出现较大温差时被释放出来。快灵生物专利申请中的防污染基因试纸卡的反应管有两级密封设计，试管盖反锁倒扣住不能轻易被打开；反应管插入试纸卡中后也被两级密封沟反锁倒扣并被密封；试纸管也被两级密封沟反锁倒扣并密封。因此其内部的扩增产物将被封存在试纸卡中，彻底消除污染隐患。
4. 快灵生物采用了一步法恒温基因扩增技术，是最方便简单且适合基层单位的选择。尽管近年陆续出现了多种恒温扩增技术，但很多技术还是需要在多个恒温条件进行多步操作才实现核酸（DNA或RNA)的扩增。快灵生物公司综合了LAMP技术与RCA技术的特点，独创了新型的恒温扩增技术，能一次添加相关试剂与样品后，在62℃温度下反应30-45分钟就达到了层析试纸需要的信号浓度。这种简单方便的一步法恒温基因扩增技术，极大地减少了其他检测试剂繁杂的操作导致的结果波动，减小了由操作人员带来的误差。
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