原文出处：Effect of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Infection on the Clearance of Haemophilus parasuis by Porcine Alveolar Macrophages Gloria.
译者按： 市场服务过程中经常发现很多猪场存在副猪嗜血杆菌的感染，特别是在保育猪群中尤为明显。有的猪场反应，其场内副猪嗜血杆菌问题由来已久，且很难处理，在译者记忆中发病持续时间最长的猪场达3年之久，发病率为40%以上，虽然经过药物和疫苗等应用后没有明显死亡，但感染问题迟迟没有有效解决。针对此类问题，我们在临床处理中除了针对副猪这一显性感染外，还对猪场隐性存在的蓝耳病感染进行了控制，通过两种措施的综合性应用在很多猪场解决了副猪的感染问题。不过根据译者了解很多人对PRRSV感染而导致副猪多发的机理性问题还不明确，由此导致临床处理时犹豫不决，对此，译文给出了非常有说服力的证据，即PRRSV感染导致PAMs对副猪嗜血杆菌吞噬能力和杀灭能力下降，从而引起副猪的继发感染。
前言
呼吸系统的基本组织结构能够避免感染性病原和有害物质的进入。喉部会厌软骨以及与其紧密相连的组织可以有效阻止外界生物进入呼吸道内部。呼吸道表面的多重结构可以起到有效的防御作用，这些结构包括粘液层、纤毛上皮细胞、基膜和粘膜下层的分泌细胞。因此，在经过上述结构的处理后，通过呼吸吸入的粒子不断进入深层肺泡并变小。这种结构能够非常有效的防止外界物质包括微生物等进入呼吸道内部。
当外界物质突破这些组织结构进入呼吸道末端后，它们也会被其他抵御机制从肺泡内清除，如细菌的感染会有肺泡巨噬细胞（AM）和中性粒细胞（PMNs）等清除。当AM不能清除进入内部的细菌时，PMN就会在肺泡内聚集来执行清除任务。
单核巨噬细胞是很多微生物的靶细胞，它们能够在其细胞内生存和复制。目前已知，PRRSV能够在单核细胞和巨噬细胞内复制，并引起二者在AM中的百分比下降，但AM的总量不会降低。现在还没有关于PRRSV感染对巨噬细胞清除其他细菌性病原如副猪嗜血杆菌影响的研究报告，也还缺少成功的说明病毒感染能够降低宿主抵抗细菌感染能力的关系模型。
为了确定PRRSV感染能够影响肺泡巨噬细胞的功能这一假设是否成立，试验中我们比较了PRRSV感染阳性和阴性（猪肺泡巨噬细胞）PAMs对副猪嗜血杆菌的吞噬比例和细胞内副猪嗜血杆菌的存活情况。
结果
体外实验
光学显微镜下，根据细胞形态确定支气管肺泡冲洗液中PAMs占到95%，用台盼蓝染色后计数发现其中活细胞数为94%左右，这些细胞被病毒感染后其存活率有一定程度下降，特别是与病毒长时间接触的实验组细胞，但这一值均没有低于89%。
用流式细胞仪对AM中能够吞噬副猪嗜血杆菌的阳性细胞进行计数，并计算其比例。这种仪器能够计数所有与FITC标记细菌有关的细胞，这些细胞假定为PAMs。计数结果显示，在4组试验中的结果均一致，即用调理素处理的细菌和未用调理素处理的细菌计数结果差异显著（P<0.05），PAMs不能有效吞噬未被调理素处理的细菌。全部使用未被调理素处理的细菌时，实验组和对照组没有明显差异。
将巨噬细胞先与病毒暴露处理2h，再加入用调理素处理的细菌，可以发现存在非常多的阳性细胞，与其他先将细胞和细菌暴露处理30min，再用病毒处理的组相比，二者具有明显差异。其他处理组中，不管AM有没有被病毒感染，在不同长短细菌暴露时间中，吞噬细胞的比例均没有明显差异。
体内试验
为了模拟感染的自然状态，从PRRSV感染猪中收集PAMs。为了保证对多核细胞增加情况监测分析的特异性，我们用两种方法进行监测：FITC标记细菌和藻红蛋白标记的抗猪巨噬细胞抗体，这种监测分析方法能够监测具有吞噬细菌功能的细胞的状态。实验显示，两个处理组中吞噬细胞的比例存在差异，与未感染PRRSV的猪只相比，在感染168h后感染猪的PAMs吞噬能力明显下降（见图2）。感染后6、12和24小时的猪与其对照组相比AM没有明显差异。
测定细胞内细菌的存活率时，细菌与细胞暴露30min后，与未感染组相比，感染后168和216h的的PAMs中存活的细菌数最高。不过，这种差异只在最后一组中明显（见图3）。其他组中的细胞内细菌存活率相似。
用PMA刺激产生的超氧化阴离子来评价PAMs的功能。用PMA刺激后，立即比较不同处理组中超氧化阴离子的产生情况，其中感染后6和12h组内PAMs中的超氧化阴离子水平与未感染组相比没有差异，与之相反，感染后168和216h组中的超氧化阴离子水平明显下降（见图4）。
讨论
本实验的目的是为了研究PAMs中PRRSV和副猪嗜血杆菌的相互作用问题。在我们的实验条件下，吞噬能力实验显示当猪与病毒接触后短期内其PAMs对副猪嗜血杆菌的吞噬能力没有影响，感染后168h，对细菌的吞噬能力呈下降趋势，这提示我们细胞的吞噬功能主要受病毒感染时间的影响。
PRRSV感染猪在感染后期，其PAMs杀灭副猪嗜血杆菌和受PMA刺激产生超氧化阴离子的能力明显下降。这种变化提示病毒对细胞依赖内部氧化机制杀灭革兰氏阴性细菌的能力具有一过性的负面作用。
综上所述，AM中超氧化物产生能力的下降能够给细菌如副猪嗜血杆菌的生存和繁殖创造良好条件。这种对巨噬细胞功能的抑制可以解释临床中见到非常多的PRRSV感染后继发感染如副猪嗜血杆菌增多的情况。据此，我们可以假设，当PRRSV爆发时，由于机体对细菌感染的主要防御机制受损，所以机体对细菌的易感性增加。
责任编辑：贾梦哲
