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蓝耳病、圆环病毒病防控新技术研究进展(2)

作者:康大夫来源:互联网时间:2013-06-05 14:28点击:

  具体作用机制如下:1、不管是蓝耳病毒还是圆环病毒要使机体致病,必须在机体靶细胞中进行大量的繁殖,引起机体的病毒血症,最终通过血液循环引起机体全身各个组织器官病变。而病毒在复制过程中,一定需要酶的参与。根据这个理论基础,研究人员首先通过基因工程的方法找到了蓝耳病毒和圆环病毒复制过程中的一个关键酶基因序列,设计引物后,通过PCR的方法快速扩增到该基因片段(dsRNA)。

  2、将该基因片段插入到PBAsi-mu6 DNA质粒载体中,以获得高效表达的dsRNA。

  3、导入的dsRNA进入机体以后,在ATP的参与下,被RNaseIII家族中的Dicer核酸酶降解成21~23nt的siRNA,每个siRNA分子3ˊ末端带2个悬挂的核苷酸,此结构是siRNA进入蛋白复合体所必须的。

  4、siRNA与一序列特异性蛋白结合形成无活性的RNA诱导沉默复合体(RNA induced silencing complex,RISC),在ATP存在时RISC被激活,被激活的RISC通过碱基配对导向同源的转录产物mRNA,把mRNA裂解成21ntRNA片段,从而诱导产生特异性的基因沉默,而且这种沉默是持续性的,即当siRNA反义链识别结合靶mRNA后,siRNA反义链可作为引物,以靶mRNA为模板在RdRP酶的催化下合成新的dsRNA,然后由Dicer切割产生新的siRNA,新siRNA再去识别mRNA,又产生新的siRNA,经过若干次合成切割循环,沉默信号就会被不断的放大,从而有效抑制蓝耳病毒和圆环病毒的复制。

  有理由相信,随着研究人员对基因沉默技术研究的不断深入,在不远的将来该技术一定会给养猪业带来福音。

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